Pomagajte razvoju spletnega mesta, delite članek s prijatelji!

PCR je test, ki se uporablja pri diagnostiki številnih bolezni. Metoda PCR omogoča prikaz neposredne prisotnosti bakterij v organizmu, natančneje njene DNK. PCR se med drugim uporablja v pri diagnozi lajmske bolezni. Kaj je tehnika PCR? Kaj je PCR v realnem času?

Vsebina:

  1. PCR (test) - kaj je tehnika PCR?
  2. PCR (test) - uporaba metode PCR
  3. PCR (test) - lajmska bolezen
  4. PCR (test) - rezultati. Ali so lahko lažno pozitivni?
  5. PCR (test) - rezultati. Ali so lahko lažno negativni

PCR(verižna reakcija s polimerazo) je primarna metoda, ki se uporablja v genetskih in molekularnih laboratorijih. Leta 1983 ga je razvila Kara Mullis, ki je zanj leta 1993 prejela Nobelovo nagrado.

PCR (test) - kaj je tehnika PCR?

PCR testsestoji iz večkratne amplifikacije (običajno v 30-40 ciklih) specifičnega fragmenta DNK, na primer genov, ki kodirajo proteine ​​Borrelia, z uporabo encima polimeraze.

Nato se za vizualizacijo pomnoženega fragmenta DNK uporabijo posebna molekularna barvila. PCR je zaradi pomnoževanja specifičnih fragmentov DNK ultra občutljiva metoda.

Pri metodi PCR se fragmenti DNK pomnožijo z uporabo specifičnih parov prajmerov za dano regijo bakterijske DNK. Na primer, ciljne regije PCR, ki se uporabljajo pri diagnozi lajmske bolezni, so geni, ki kodirajo proteine, npr. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA.

Biološki material, iz katerega je mogoče opraviti test, je:

  • kri
  • odsek kože zaradi selitvenega eritema
  • cerebrospinalna tekočina
  • sinovialna ali hrustančna tekočina
  • urin

PCR (test) - uporaba metode PCR

Poleg diagnoze lymske borelioze lahko metoda PCR zazna specifične fragmente DNK drugih mikroorganizmov ali ljudi. Zato se metoda PCR uporablja tudi pri:

  • diagnoza in spremljanje virusnih okužb: virusi herpesa (virus herpesa, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusi hepatitisa (HBV in HCV)
  • diagnoza in spremljanje bakterijskih okužb, zlasti tistih bakterij,ki jih ni mogoče identificirati s kulturami, npr. tuberkuloza
  • diagnoza in spremljanje neoplastičnih bolezni: levkemija, rak dojke, kolorektalni rak, pljučni rak
  • diagnoza nagnjenosti k raku: rak dojk in jajčnikov (geni BRCA1 in BRCA2), rak debelega črevesa in danke (geni APC in CHEK2)
  • diagnoza genetskih bolezni: hemokromatoza (gen HFE), talasemija (geni HBA1 in HBA2), celiakija (geni HLA)
  • testi očetovstva, ki odkrijejo združljivost DNK otroka in očeta
Vredno vedeti

Trenutno obstaja veliko sprememb metode PCR. Na primer, pri diagnostiki lajmske bolezni se večinoma uporabljata metodi gnezdene PCR (gnezdene PCR) in PCR v realnem času ( ). Slednja je kvantitativna metoda in omogoča določitev natančnega števila kopij DNK borelije v testiranem biološkem materialu.

PCR (test) in lajmska bolezen

Osnova za diagnozo lajmske bolezni je serološko testiranje. Vendar pa obstajajo klinične situacije, ki lahko povzročijo, da so ti testi lažno negativni:

  • serološko okno, t.j. začetno obdobje okužbe, v katerem telo še ne proizvaja specifičnih protiteles IgM in IgG proti boreliji
  • pri ljudeh z oslabljenim imunskim sistemom, ki ne proizvajajo dovolj protiteles
  • prisotnost imunskih kompleksov, ki so sestavljeni iz antigenov borelije in specifičnih protiteles zanje ter preprečujejo odkrivanje protiteles s serološkimi metodami

Če obstaja sum, da ima bolnik simptome lajmske borelioze, in so rezultati serološkega testa negativni, se lahko izvede molekularni test, ki temelji na metodi PCR.

DNK spirohet Borrelia je mogoče odkriti v zgodnjih fazah okužbe, saj je takrat število spirohet v telesnih tekočinah največje.

Pri diagnozi lymske borelioze se uporabljajo predvsem serološke metode, kot je ELISA, vendar je v nekaterih kliničnih situacijah koristno genetsko testiranje z uporabo metode PCR.

Daljši kot je čas od okužbe, manjša je verjetnost odkrivanja bakterijske DNK. Zato v nekaterih primerih pred izvedbo PCR testa bakterije gojijo na posebnih gojiščih 1-2 tedna in nato opravijo test.

Ta pristop se uporablja v primeru suma na lajmsko boreliozo in odvzeto cerebrospinalno tekočino. V pozni fazi okužbe je bolj primerno opraviti ELISA test.

Metode PCR se ne sme uporabljati pri rutinski diagnozi lajmske bolezni zaradi pomanjkanja standardizacijeglede pojavljanja sort Borrelia burgdorferi na Poljskem.

Vendar pa je v primeru težav pri diagnozi (zlasti v zgodnji fazi bolezni) rezultat PCR testa v pomoč pri diagnostičnem procesu.

Pozitiven rezultat testa pomeni, da je bila v testiranem materialu odkrita prisotnost DNK Borrelia burgdorferi in njenih različic, vendar ne pojasnjuje, ali je organizem aktivno okužen. Po drugi strani pa negativni rezultat ne izključuje prisotnosti bakterij v telesu.

Nekateri laboratoriji ponujajo testiranje na prisotnost DNK borelije v klopu. Vendar rezultat takega testa ni osnova za diagnozo lajmske borelioze pri ugrizni osebi.

PCR - rezultati. Ali so lahko lažno pozitivni?

PCR je ultra občutljiva metoda in hkrati zelo občutljiva na kontaminacijo. Zato je zelo pomembno pri testiranju, ki temelji na PCR, izbrati ustrezno notranjo kontrolo, da izključimo lažno pozitivne rezultate.

Ključnega pomena je tudi pravilno zbiranje materiala za preiskave ter izkušnje in zanesljivost diagnostika, ki opravlja test.

PCR - rezultati. Ali so lahko lažno negativni

Kot pri vsakem laboratorijskem testu se lahko tudi pri metodi PCR pojavijo lažno negativni rezultati. Tukaj je ključnega pomena zbrati kri za ustrezen antikoagulans, saj lahko nekateri od njih, kot je heparin, zavirajo reakcijo PCR.

Zbiranje materiala po začetku antibiotične terapije lahko zmanjša učinkovitost reakcije PCR in poveča verjetnost lažno negativnih rezultatov.

Ne smemo pozabiti, da bakterije Borrelia živijo zelo kratek čas v krvi in ​​telesnih tekočinah, saj zaradi posebnih receptorjev zelo hitro prodrejo v "težko dostopna" mesta v telesu.

Zato je v nasprotju z diagnostiko drugih mikroorganizmov število spirohet Borrelia v biološkem materialu majhno, včasih celo na meji odkrivanja metode PCR. To lahko povzroči tudi lažno negativno.

Reference

  1. Dunaj J. et al Pomen metode PCR pri diagnostiki lymske borelioze. Prebrskaj Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
  2. Laboratorijska diagnostika bolezni, ki jih prenašajo klopi Priporočila delovne skupine: Nacionalna zbornica laboratorijskih diagnostikov, Nacionalni inštitut za javno zdravje-Nacionalni higienski inštitut, Državni svetovalec za področje nalezljivih bolezni, Oddelek za nalezljive bolezni in nevroinfekcije , Medicinska univerza v Białystoku, Poljsko društvo za virusologijo, Varšava 2014.
  3. Ružić-Sabljić E. in Cerar T. Napredek v molekularni diagnostiki lajmske borelioze. Expert Rev Mol Diag. 2022januar; 17. (1): 19-30.
  4. Valones M.A.A. et al.. Načela in aplikacije polimerazne verižne reakcije na medicinskih diagnostičnih področjih: pregled. Braz J Microbiol. 2009 Jan-Mar; 40 (1): 1-11.
O avtorjuKarolina Karabin, dr.med., molekularni biologinja, laboratorijska diagnostika, Cambridge Diagnostics PolskaPo poklicu biologinja, specialistka mikrobiologije, in laboratorijska diagnostika z več kot 10 letnimi izkušnjami v laboratorijskem delu. Diplomant Visoke šole za molekularno medicino in član poljskega združenja za humano genetiko. Vodja raziskovalnih štipendij v Laboratoriju za molekularno diagnostiko na Oddelku za hematologijo, onkologijo in notranje bolezni Medicinske univerze v Varšavi. Zagovarjala je naziv doktorice medicinskih znanosti s področja medicinske biologije na 1. medicinski fakulteti Medicinske univerze v Varšavi. Avtor številnih znanstvenih in poljudnoznanstvenih del s področja laboratorijske diagnostike, molekularne biologije in prehrane. Dnevno kot specialist na področju laboratorijske diagnostike vodi vsebinski oddelek v Cambridge Diagnostics Polska in sodeluje z ekipo nutricionistov na CD Dietary Clinic. Svoje praktično znanje o diagnostiki in dietoterapiji bolezni deli s specialisti na konferencah, izobraževanjih ter v revijah in spletnih straneh. Zanima jo predvsem vpliv sodobnega načina življenja na molekularne procese v telesu.

Pomagajte razvoju spletnega mesta, delite članek s prijatelji!

Kategorija:

Raziskave