Test ELISA odkriva številne bolezni, zato se široko uporablja v medicini in še več. Vendar pa je test ELISA najbolj znan po diagnozi lajmske borelioze. Kaj je test ELISA? Kako interpretirati rezultate? Kakšna je cena testa?

Vsebina:

  1. ELISA test - kaj zazna? Uporaba ELISA
  2. ELISA test - kaj je test?
  3. ELISA test in lajmska bolezen - kdaj opraviti?
  4. ELISA test - cena. Koliko stane test ELISA?
  5. ELISA test - rezultati. Ali so lahko lažno pozitivni?
  6. ELISA test - rezultati. Ali so lahko lažno negativni?

ELISA test , t.j. encimsko vezan imunski test, je pogosto uporabljena laboratorijska metoda, ki med drugim služi za kvantitativno odkrivanje protiteles v krvi.

Zaradi tegaELISA testnajdenaaplikacijapri diagnostiki bakterijskih bolezni, kot jelajmska bolezen z Lyme.

Prednost metode ELISA je njena preprostost, hitra izvedba in visoka občutljivost. Metoda ELISA se izvaja z uporabo posebnih plastičnih plošč z vdolbinicami, napolnjenimi z npr. borelijevimi proteini (antigeni) in specifičnimi monoklonskimi protitelesi, ki so zasnovana za odkrivanje protiteles v vzorcu pacienta.

ELISA test - kaj zazna? Uporaba ELISA

Zaradi visoke občutljivosti in preprostosti metode ELISA je bila uporabna pri diagnostiki številnih bolezni, najbolj znana pa je kot diagnostična metoda lajmske bolezni.

Pri diagnostiki lajmske borelioze se uporablja t.i. indirektni ELISA, ki omogoča odkrivanje specifičnih IgM ali IgG v testiranem materialu. Na enak način je mogoče zaznati protitelesa za diagnostične namene:

  • virusne okužbe: virusi herpesa (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusi hepatitisa (HBV in HCV)
  • okužbe s protozoji: toksoplazmoza, giardiaza
  • avtoimunske bolezni: celiakija (protitelesa proti tTG ali anti-DPG), Hashimotova bolezen (protitelesa proti TG in proti TPO), vnetne črevesne bolezni (protitelesa proti ASCA in anti-ANCA)
  • parazitske bolezni in alergije,v katerem so odkrita specifična protitelesa IgE. Njihova povišana raven lahko kaže na prisotnost alergij, na primer na cvetni prah in hrano, ali parazitske invazije (oborožena trakulja, človeška okrogla črva)

Obstajajo tudi modifikacije metode ELISA (t. i. sendvič ELISA), ki omogočajo odkrivanje testiranega vzorca beljakovin, ki niso protitelesa. Nato je cilj raziskave odkriti v biološkem materialu:

  • fragmenti virusov ali bakterij, najpogosteje so to antigeni, specifični za dani patogen
  • serumski hormoni, npr. estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
  • encimi, npr. kalprotektin, pankreatična elastaza, alkalna fosfataza
  • tumorskih markerjev, npr. CA-125
  • prisotnost zdravil v serumu

Ta metoda se uporablja tudi v živilski industriji, kjer je mogoče zaznati sledove alergenov (npr. mleko, arašidi), GSO ali toksinov v hrani.

ELISA test - kaj je ta test?

Diagnoza npr. lymske borelioze z metodo ELISA je sestavljena iz odkrivanja imunskih beljakovin v biološkem materialu – protiteles, ki nastanejo med odzivom na antigene borelije.

Protitelesa se testirajo v dveh razredih, IgM in IgG. IgM so prva protitelesa, ki se pojavijo v telesu ob stiku z bakterijami in sčasoma upadajo.

Njihovo mesto zavzamejo bolj obstojna protitelesa IgG, ki lahko ostanejo v telesu več deset let.

Na ta način se prisotnost bakterij v telesu posredno testira z odkrivanjem protiteles, ki so specifično usmerjena proti spirohetam Borrelia.

Protitelesa na različnih stopnjah okužbe so lahko usmerjena proti različnim proteinom borelije. Na primer, v zgodnji fazi je to protein p41.

V kasnejših fazah se začne pojavljati vedno več beljakovin, kot so p21, p30, p39, p43. Zato je diagnoza lajmske borelioze izjemno težka.

Izbira bakterijskih beljakovin je izjemno pomembna, da ima test visoko diagnostično vrednost. Zato je treba rutinsko pri diagnozi lajmske borelioze uporabljati teste ELISA II generacije ali III generacije, pri katerih so nabori beljakovin izbrani tako, da dobimo najbolj zanesljiv rezultat.

ELISA test in lajmska bolezen. Kdaj nastopiti?

Lymska borelioza je bakterijska bolezen, ki jo povzroča bakterija Borrelia burgdorferi in njene številne sorte.

Diagnoza bolezni ni enostavna zaradi kompleksnosti imunskega odziva proti boreliji in nepopolnosti laboratorijskih metod.

Najpogosteje uporabljena laboratorijska metoda je zelo občutljiva metoda ELISA, ki zazna specifična protitelesa proti bakterijskim beljakovinam.

Pri diagnozi lymske borelioze se uporablja posredna metoda ELISA, pri kateri ločimo naslednje stopnje:

  • inkubacija vdolbinic na plošči z materialom, zbranim od pacienta, npr. serumom. Če so v testiranem materialu protitelesa proti boreliji, se vežejo na beljakovine na dnu reakcijske luknje
  • nato odvečni serum speremo s posebno pralno tekočino (pufrom) in t.i. konjugat, t.j. protitelo, povezano z encimom, ki se veže na prej povezana protitelesa v reakcijskih vdolbinicah
  • Substrat za konjugat je dodan kasneje in ni (pozitivne) ali ni barvne reakcije (negativne)
  • zadnji korak je odčitavanje s čitalnikom (spektrofotometrom) koncentracije protiteles proti boreliji v pacientovem serumu

Metoda ELISA za lajmsko boreliozo se izvaja s krvjo, v primeru nevroloških simptomov (nevroborelioza) pa tudi z likvorjem.

Sinovialne tekočine ne smete testirati, ker obstaja velika verjetnost lažno pozitivnih rezultatov.

Osnova za diagnozo bolezni so klinični simptomi, ki nakazujejo nanjo, potrjeni z rezultati laboratorijskih preiskav.

Dodatek izvida laboratorijskega testa brez prisotnosti simptomov ne dovoljuje diagnoze lajmske borelioze, saj se je izkazalo, da se protitelesa proti spirohetam Borrelia odkrijejo tudi pri zdravih ljudeh.

Serološka diagnoza lymske borelioze se začne s pol-kvantitativnim presejalnim testom ELISA. Če je rezultat negativen, to pomeni, da niso bile odkrite nobene spirohete Borrelia ali pa je rezultat lažno negativen.

Če je rezultat pozitiven ali šibko pozitiven (dvoumno), potrditveno Western blot testiranje, ki je zelo specifično.

To je za potrditev "resničnosti" rezultatov, pridobljenih z metodo ELISA. Med diagnostiko ne morete preskočiti nobenega od zgornjih korakov in na primer opraviti diagnostiko z metodo Western blot ali postaviti diagnozo na podlagi pozitivnega rezultata samo z metodo ELISA.

Na Poljskem se diagnoza lajmske borelioze zelo pogosto konča v prvi fazi presejanja, kar povzroči napačno razlago pozitivnih ali šibko pozitivnih rezultatov.

Vredno vedeti

ELISA test - cena. Koliko stane test ELISA?

Test stane okoli 60zlotov in je narejen takoj. Vendar pa lahko na rezultate napotitve počakate približno tri mesece.

ELISA test - rezultati. Ali so lahko lažno pozitivni?

Lažno pozitivni rezultati so posledica navzkrižne reaktivnosti protiteles IgM z drugimi beljakovinami. Protitelesa, ki jih proizvaja telo, lahko "napačno" prepoznajo antigen drugih mikroorganizmov kot antigen borelije.

Najpogostejše "napake" se pojavljajo pri ljudeh, okuženih s treponemo pallidum, virusi herpesa ter pri ljudeh s sistemskim eritematoznim lupusom in drugimi revmatskimi boleznimi.

ELISA test - rezultati. Ali so lahko lažno negativni?

V zgodnji fazi okužbe se lahko pojavijo lažno negativni rezultati, potem je treba test ponoviti po približno 3-4 tednih. To se imenuje serološko okno, torej začetno obdobje okužbe, v katerem telo še ni "uspelo" proizvesti specifičnih protiteles.

Podobno pri ljudeh z oslabljenim imunskim sistemom, ki ne tvorijo dovolj protiteles.

Velik problem, predvsem pri zelo intenzivnih okužbah, je pojav t.i. imunski kompleksi, ki so sestavljeni iz antigenov Borrelia spirochetes in specifičnih protiteles zanje.

Zaradi tega so protitelesa "nevidna" za pogosto uporabljene metode, kot je ELISA, in čeprav so prisotna v testiranem materialu, jih ni mogoče zaznati.

V takih primerih lahko laboratorij uporabi razgradnjo imunskih kompleksov. To zdravljenje je zasnovano tako, da sprošča protitelesa. Vendar se ta metoda ne uporablja široko zaradi pomanjkanja standardizacije v laboratorijih.

Vredno vedeti

Zakaj diagnoza lajmske bolezni ni enostavna?

To je posledica kompleksnosti imunskega odziva proti boreliji in omejitev laboratorijskih metod. Raznolikost sort in pojav novih okužb, ki povzročajo okužbe, zlasti na evropski celini, ne olajšuje razvoja učinkovitih diagnostičnih metod.

V Evropi se je pred kratkim pojavilo več sort, kot so Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana in Borrelia spielmanii. Poleg tega se v telesu lahko spirohete Borrelia spremenijo v ciste ali ostanejo na mestih, ki niso dostopna celicam imunskega sistema.

Biti tako "neviden" za imunski sistem. Poleg tega je bilo dokazano, da lahko tkiva vsebujejo drobce bakterij, ki imajo močno protivnetne lastnosti. Verjame se, da so odgovorni za kronične simptome lajmske bolezni, kljub negativnim rezultatom študijelaboratorij.

Reference

1. Witecka-Knysz E. in drugi Lymska bolezen: zakaj je diagnoza tako težka? Laboratorijski diagnostik april 2007.2. Moore A. in drugi Trenutne smernice, pogoste klinične pasti in prihodnje smernice za laboratorijsko diagnostiko lajmske bolezni, Združene države. Emerg Infect Dis. julij 2016, 22 (7) .3. Laboratorijska diagnostika bolezni, ki jih prenašajo klopi Priporočila Delovne skupine: Nacionalna zbornica laboratorijskih diagnostikov, Nacionalni inštitut za javno zdravje-Nacionalni higienski inštitut, Državni svetovalec za področje nalezljivih bolezni, Katedra za nalezljive bolezni in nevroinfekcije, Medicinska univerza v. Białystok, Polish Society of Virology, Varšava 2014. Hosseini S. i co: Encimsko-vezan imunosorbentni test (ELISA) od A do Ž. Springer 2022.

O avtorjuKarolina Karabin, dr.med., molekularni biologinja, laboratorijska diagnostika, Cambridge Diagnostics PolskaPo poklicu biologinja, specialistka mikrobiologije, in laboratorijska diagnostika z več kot 10 letnimi izkušnjami v laboratorijskem delu. Diplomant Visoke šole za molekularno medicino in član poljskega združenja za humano genetiko. Vodja raziskovalnih štipendij v Laboratoriju za molekularno diagnostiko na Oddelku za hematologijo, onkologijo in notranje bolezni Medicinske univerze v Varšavi. Zagovarjala je naziv doktorice medicinskih znanosti s področja medicinske biologije na 1. medicinski fakulteti Medicinske univerze v Varšavi. Avtor številnih znanstvenih in poljudnoznanstvenih del s področja laboratorijske diagnostike, molekularne biologije in prehrane. Dnevno kot specialist na področju laboratorijske diagnostike vodi vsebinski oddelek v Cambridge Diagnostics Polska in sodeluje z ekipo nutricionistov na CD Dietary Clinic. Svoje praktično znanje o diagnostiki in dietoterapiji bolezni deli s specialisti na konferencah, izobraževanjih ter v revijah in spletnih straneh. Zanima jo predvsem vpliv sodobnega načina življenja na molekularne procese v telesu.

Kategorija:

Raziskave